1、病毒純化通過(guò)超速離心過(guò)濾等方法對(duì)病毒進(jìn)行純化，以提高病毒滴度病毒滴度測(cè)定使用合適的方法如熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)測(cè)定病毒的滴度，以確保病毒的質(zhì)量注具體包裝步驟可能因?qū)嶒?yàn)條件和試劑盒的不同而有所差異，建議參考具體試劑盒的說(shuō)明書進(jìn)行操作以上內(nèi)容詳細(xì)闡述了慢病毒包裝的原理；質(zhì)粒純化是大多數(shù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的常用技術(shù)雖然標(biāo)準(zhǔn)的堿裂解方法已經(jīng)很成熟，但仍然可能出現(xiàn)令人驚訝的問(wèn)題本指南列出了；1986年，QIAGEN推出首款質(zhì)粒純化試劑盒，提取技術(shù)上的革新將原本2天才能完成的質(zhì)粒純化縮短到2小時(shí)，從此開啟了用試劑盒完成；1986年，全球第一款質(zhì)粒純化試劑盒在德國(guó)誕生了！這可是一次了不起的的技術(shù)革新，原先要花兩天才能完成的質(zhì)粒純化，我真的沒(méi)夸。

2、提取220ug質(zhì)粒DNA介紹該試劑盒將經(jīng)典的堿裂解法和磁珠法純化方式結(jié)合，適合從96個(gè)115ml培養(yǎng)過(guò)夜的菌液中純化220ug高純度；對(duì)于單點(diǎn)突變，Stratagene公司的QuikChangeSiteDirectedMutagenesisKit是不錯(cuò)的選擇通過(guò)巧妙設(shè)計(jì)，將質(zhì)粒定點(diǎn)突變技術(shù)變得簡(jiǎn)單有效準(zhǔn)備突變的質(zhì)粒必須是從常規(guī)大腸桿菌中經(jīng)純化試劑盒Miniprep或者氯化銫純化抽提的質(zhì)粒設(shè)計(jì)一對(duì)包含突變位點(diǎn)的引物正反向和模版質(zhì)粒退火后用PfuTurbo聚合酶“循環(huán)延伸”；是否需要純化，還需進(jìn)一步檢測(cè)才能確定 1測(cè)濃度和純度，是否達(dá)標(biāo) 2跑電泳看條帶是否與測(cè)的數(shù)據(jù)相互印證 如果上述兩點(diǎn)滿足，就不需要純化，否則需要進(jìn)一步純化不過(guò)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，一般都不需要，我們實(shí)驗(yàn)室用的是GNT系列的試劑盒，提取結(jié)果就直接進(jìn)入下游實(shí)驗(yàn)了，效果挺穩(wěn)定 質(zhì)粒是真核細(xì)胞細(xì)胞核外或原核。

3、樓上說(shuō)的是一方面PCR產(chǎn)物測(cè)序也是可以的，可以送粗樣，也就是不純化的，也可以送純化好的但很多公司測(cè)的不是很好，所以一般建議轉(zhuǎn)到克隆載體中保存了送菌液或質(zhì)粒測(cè)序PCR產(chǎn)物純化是去除多余的dNTP和引物二聚體用純化好的片段連接轉(zhuǎn)化可以降低背景，提高轉(zhuǎn)化效率通常轉(zhuǎn)化后我們用幾種方法來(lái)確認(rèn)；一個(gè)是從細(xì)菌中提取，一個(gè)是把提取出來(lái)的DNA純化區(qū)別很明顯啊這兩者之間共通之處，我覺(jué)得是都是要把DNA沉淀再溶解，這樣達(dá)到從細(xì)菌中分離DNA和純化DNA的效果一般；從具體操作方法分可以分為堿裂解法煮沸法牙簽法等在氫氧化鈉pH120126堿性環(huán)境和去污劑SDS的作用下，細(xì)菌蛋白質(zhì)變性，細(xì)胞破裂，細(xì)菌染色體DNA變性，雙鏈DNA氫鍵斷裂，DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)遭破壞而發(fā)生變形但由于質(zhì)粒DNA相對(duì)分子質(zhì)量較小，公價(jià)閉環(huán)的DNA雖然變性但仍處于拓?fù)淅p繞狀態(tài)，呈環(huán)狀超；傳統(tǒng)商業(yè)化的質(zhì)粒抽提試劑盒難以滿足大規(guī)模制備基因載體的需求，主要是因?yàn)?產(chǎn)量低，至多能提供數(shù)毫克級(jí)的質(zhì)粒2產(chǎn)品質(zhì)。

4、無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒純化試劑盒采用新型專有陰離子交換樹脂，以現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)方案約一半的時(shí)間分離高級(jí)轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒 DNA，獲得內(nèi)毒素水平低；一慢病毒載體構(gòu)建與質(zhì)粒純化 質(zhì)粒選擇根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇目的質(zhì)粒，如CRISPR系統(tǒng)的IentiCRISPR v2shRNA敲低系統(tǒng)的pLKO1TRC或過(guò)表達(dá)系統(tǒng)的pCDHCMVMCSEF1Puro同時(shí)準(zhǔn)備病毒包裝輔助質(zhì)粒psPAX2和pMD2G質(zhì)粒擴(kuò)增與純化將上述質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至DH5α感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行擴(kuò)增使用去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試。

5、針對(duì)PCR產(chǎn)物的純化試劑盒通常適用于小片段DNA如果PCR產(chǎn)物的片段大小在這個(gè)范圍內(nèi)，使用純化試劑盒是合適的對(duì)于質(zhì)粒等較大片段的DNA，雖然純化回收效率可能會(huì)有所下降，但只要操作得當(dāng)，仍然可以獲得足夠量的純化產(chǎn)物用于轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)綜上所述，在轉(zhuǎn)化大腸桿菌之前對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化通常是必要的，且不會(huì)對(duì)。